1.手術切除的組織塊迅速置于預冷的生理鹽水中,漂洗數次,以清潔表面的血跡,將組織稱量后切成幾個較小的組織塊放入組織勻漿器中。
2. 取適當量的RIPA裂解液混勻,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的終濃度為1mM。
3. 按組織凈重(g):裂解液(ml)=1:10的比例,加入相應體積的裂解液進行勻漿(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液, 如果需要高濃度的蛋白樣品, 可以適當減少裂解液的用量) 。
4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g離心3- 5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)作。